Cómo esterilizar frascos de vidrio en autoclave de forma segura
Por DWK Life Sciences
Un autoclave es un equipo especializado diseñado para proporcionar un método físico para la desinfección y esterilización. El proceso se logra utilizando una combinación de vapor, alta presión y tiempo. El vapor es notablemente efectivo en la transferencia de energía térmica (en comparación con el aire seco) y puede esterilizar una carga a 121 ° C en solo 15 minutos.
La mayoría de los frascos de vidrio de laboratorio son adecuadas para el autoclave. Sin embargo, es importante tener en cuenta algunas diferencias clave entre los tipos de productos de vidrio utilizados en el laboratorio, así como los métodos de mejores prácticas al llevar a cabo un ciclo de autoclave.
En este artículo, respondemos a preguntas comunes con consejos que le permitirán someter a autoclave frascos de vidrio de forma segura.
1) ¿Es seguro esterilizar en autoclave todo tipo de frascos de vidrio de laboratorio?
Antes de esterilizar en autoclave frascos de laboratorio, es importante considerar la idoneidad de diferentes tipos de vidrio y frascos. Los frascos de vidrio de borosilicato son seguros para el autoclave ya que el material tiene una muy buena resistencia al choque térmico. Existe un riesgo mucho mayor de rotura al esterilizar en autoclave frascos de vidrio hechos de cal sodada o vidrio de sílex y, aunque sigue siendo posible someter a autoclave frascos de este tipo, el material no posee el mismo margen de seguridad.
Los frascos de laboratorio recubiertos de plástico también se pueden esterilizar en autoclave de forma segura, sin embargo, el material de recubrimiento está sujeto a hidrólisis por vapor durante el proceso de autoclave, lo que significa que generalmente pueden soportar menos ciclos de autoclave que los frascos de vidrio sin revestimiento.
Por lo general, no debe llenar recipientes de vidrio más allá del 75 por ciento de la capacidad nominal, ya que esto permite la expansión del líquido y la posible formación de espuma, evitando el desbordamiento. Sin embargo, la capacidad de llenado segura también depende de la naturaleza del líquido. Los frascos de vidrio que contengan agua o tampones acuosos pueden llenarse en la línea de llenado nominal del recipiente. Mientras que los frascos utilizados para esterilizar medios a base de agar solo deben llenarse al 50% de la capacidad del contenedor.
2) ¿Cómo se deben cargar los frascos de laboratorio en el autoclave?
En primer lugar, al operar un autoclave, es aconsejable usar un equipo de protección personal. Por lo general, esto debe incluir protección completa para los ojos / cara, zapatos cerrados y guantes resistentes al calor para eliminar los artículos, especialmente el material de vidrio caliente.
Evite apilar demasiado el autoclave para permitir que circule vapor para un proceso de esterilización efectivo. También es aconsejable asegurarse de que los frascos se hayan limpiado antes de colocarlos en un autoclave. Esto evitará que cualquier sustancia contaminante se funda en las paredes del frasco de vidrio.
Los frascos grandes y pesados, como los de 20 L, también deben tener una pequeña cantidad de agua destilada (WFI o purificada) colocada dentro de ellos para ayudar a generar vapor cuando se esterilizan secos (vacíos) en un autoclave.
3) ¿Cómo se deben esterilizar al vapor los frascos de vidrio con tapones de rosca?
Al esterilizar o someter a autoclave los frascos, el tapón de rosca debe estar ajustado con un máximo de una vuelta aplicada. En un recipiente cerrado, el contenido se expandirá causando una gran diferencia de presión (más de 4 bar absolutos) que puede resultar en una falla explosiva. Además, las tapas que no están suficientemente desenroscadas pueden crear un vacío en el frasco durante la fase de enfriamiento. Si los frascos no se ventilan correctamente, el líquido en el interior no puede hervir durante la fase de reenfriamiento y, por lo tanto, permanecerá sobrecalentado durante un tiempo prolongado. Nunca selle ni mueva recipientes de líquidos sobrecalentados. Si la tapa se deja suelta (1/2 vuelta), entonces no hay diferencia de presión entre el vapor dentro del autoclave y el interior del frasco.
Los frascos se pueden esterilizar en autoclave de forma segura con tapas selladas si el autoclave de vapor tiene compensación de presión de soporte.
En autoclaves convencionales (sin compensación de presión), una tapa de ventilación de membrana es una opción más segura y conveniente. Una ecualización de presión de dos se lleva a cabo a través de la membrana de ePTFE de 0,2 micras, al tiempo que permite que la tapa permanezca bien cerrada para reducir el riesgo de contaminación después de que se complete el proceso de autoclave. Las tapas de ventilación de membrana no deben usarse con frascos de más de 3500 ml.
Para operaciones GMP, aplicaciones médicas o para frascos de 5 litros o más, el uso de una tapa de conector de un solo puerto equipada con un filtro de ventilación estéril sería una opción más adecuada que las tapas de membrana. Por ejemplo, se puede usar una tapa de acero inoxidable GL 45 de un solo puerto con un filtro de disco o cápsula de aire estéril de 0,2 micras y 50 mm de grado farmacéutico validado. Esta opción está especialmente recomendada para frascos más grandes de más de 2 litros.
4) ¿Debo cubrir la parte superior de los frascos con papel de aluminio antes de esterilizarlas en autoclave?
Esta es una práctica común en muchos laboratorios de investigación, pero poner papel de aluminio sobre las bocas de los recipientes de vidrio disminuye la probabilidad de que esos artículos se esterilicen adecuadamente para empezar. La lámina debe aplicarse suelta para permitir la penetración del vapor y luego no ofrece protección contra la contaminación después de la esterilización.
5) ¿Cuánto tiempo debe durar el ciclo de autoclave?
Se recomienda la esterilización por vapor a + 121, 126 o + 134 °C, dependiendo de la aplicación. A título orientativo, la norma británica BS EN 285:1997 8.3.1 establece: "El tiempo de conservación no será inferior a 15 min, 10 min y 3 min para temperaturas de esterilización de 121 °C, 126 °C y 134 °C, respectivamente".
Es recomendable utilizar un indicador biológico o químico para confirmar que el autoclave funciona correctamente. Si alguno de los indicadores falla, se debe examinar el autoclave para identificar y corregir el problema. También es fundamental volver a autoclave la carga una vez que se aborda el problema para garantizar la esterilidad.
La cinta de autoclave también se puede colocar en los artículos, con marcas en la cinta que se hacen visibles una vez que se alcanza la temperatura crítica. Sin embargo, a diferencia de otros métodos, como los indicadores biológicos, la cinta de autoclave no proporciona confirmación de esterilización. En su lugar, se puede utilizar para identificar elementos esterilizados en autoclave frente a los no esterilizados en autoclave.
Finalmente, al descargar el autoclave, asegúrese de hacerse a un lado para mantener su cara y cuerpo alejados de la puerta y el vapor. También es recomendable abrir la puerta y esperar diez minutos para permitir que los artículos se enfríen si es posible. Deje siempre que los materiales esterilizados en autoclave se enfríen a temperatura ambiente antes de transportarlos.
6) ¿Con qué frecuencia se pueden esterilizar en autoclave los frascos de laboratorio?
El número de ciclos de autoclave a los que se puede someter un producto depende del tipo de frasco que se esteriliza en autoclave, con frascos de cal sodada y frascos recubiertos de plástico capaces de soportar menos ciclos de autoclave que los frascos de laboratorio de borosilicato 3.3 sin recubrimiento.
A pesar de la excelente resistencia del borosilicato 3.3 al choque térmico, estos frascos pueden dañarse y volverse inadecuados para el autoclave con el tiempo. Esto se debe a que la mayor parte de la resistencia a la tracción del vidrio de borosilicato reside en la condición de su superficie y si el vidrio se raya, incluso submicroscópicamente, su resistencia se reduce considerablemente. Por lo tanto, mientras que los frascos con una superficie sin arañazos sobrevivirán de manera segura a los ciclos de presión repetidos, los frascos más viejos pueden no hacerlo.
Desafortunadamente, es imposible predecir cuándo un frasco más viejo podría fallar. Por lo tanto, DWK Life Sciences recomienda el reemplazo de artículos de forma rutinaria, y que cada artículo debe ser inspeccionado visualmente minuciosamente antes de su uso, para detectar cualquier signo de arañazos, astillas u otros defectos. En caso de detección, el producto debe retirarse del servicio y desecharse inmediatamente.